Útskýrt: Af hverju eru nokkrir með Covid einkenni að prófa neikvæð?

Margir með Covid-19 einkenni hafa verið að prófa neikvætt. Það eru nokkrar líklegar ástæður, svo sem stökkbreytingar á veirunni sem sleppur við greiningu, gæði sýnatöku og prófunar og virkni RT-PCR setta.

Próf geta farið úrskeiðis á ýmsum stigum, allt frá slæmri sýnatöku og geymslu til gallaðs útdráttar og mögnunar. (Hraðmynd: Vishal Srivastav)

Þar sem Indland á í erfiðleikum með að takast á við áður óþekkta eftirspurn eftir RT-PCR prófum benda skýrslur til þess að allt að 20% einkenna Covid-19 sjúklinga séu að prófa neikvæðar.

Þessi augljósa þróun rangra neikvæðra niðurstaðna getur neitað alvarlegum sjúklingum um innlögn á sjúkrahús og bráðaþjónustu á sama tíma og þeir sem eru einkennalausir hreyfa sig og dreifa vírusnum. Þróunin hefur orðið til þess að sérfræðingar, þar á meðal forstjóri AIIMS, Dr Randeep Guleria, mæla með Covid-19 meðferð fyrir alla sem sýna klassísk einkenni óháð RT-PCR niðurstöðum.

Fréttabréf| Smelltu til að fá bestu útskýringar dagsins í pósthólfið þitt

Hvers vegna rangar neikvæðar

RT-PCR próf, talin gulls ígildi við greiningu á Covid-19, er ekki ætlað að vera fullkomið. Lágmarksnæmi (geta til að greina jákvæða) sem Indian Council of Medical Research (ICMR) krefst til að staðfesta RT-PCR próf er 95%. Það þýðir að búist er við allt að 5% fölskum neikvæðum niðurstöðum.

Þó að sagnfræðiskýrslur bendi til þess að hlutfall falskra neikvæðra niðurstaðna sé að aukast um Indland, þá er engin rannsókn enn til sem styður þetta.

Fræðilega séð ákvarða fjórir breiðir þættir nákvæmni RT-PCR prófs: veiruálag í manneskjunni, gæði sýnasöfnunar og vinnslu, virkni prófunarbúnaðarins sjálfs og einnig viðmið fyrir túlkun prófsins.

VEIRUHÁLÐ: Venjulega birtist Covid-19 á fullnægjandi hátt á fimmta degi sýkingarlotu. Sýktur einstaklingur, sem er prófaður fyrr eftir útsetningu, gæti reynst Covid-neikvæð. Þetta er kannski ekki stór þáttur á bak við nýlega falska neikvæða þróun þar sem ákveðin Covid-19 stökkbrigði sýna greinilega snemma einkenni.

Nokkrir sjúklingar með einkenni sem reyndust ranglega neikvæðir í RT-PCR prófum hafa í kjölfarið verið staðfestir Covid-jákvæðir í berkju- og lungnaskolunarprófum (BAL) sem safna sýnum úr neðri öndunarvegi í gegnum berkjusjá. Þetta hefur leitt til getgáta um að ákveðin stökkbrigði fari framhjá efri öndunarvegi til að miða við lungun - atburðarás sem getur hafnað RT-PCR prófi, byggt á sýni sem safnað er úr nefholi og hálsi, veirumagninu sem þarf til að fá nákvæma niðurstöðu.

GETASPRENNING: Fjöldi Covid prófunarstofnana á Indlandi jókst úr 14 í febrúar 2020 í meira en 2.400 í apríl 2021. Svo hröð stækkun þurfti að samþykkja hundruð rannsóknarstofa fyrir RT-PCR próf og þjálfa þúsundir tæknimanna í flýti.

Til öryggis skráði ICMR í júlí 2020 30 gæðaeftirlitsstofur til að athuga með allar Covid rannsóknarstofur sem hún samþykkti. Aðrar 8 QC rannsóknarstofur hafa bæst við síðan. Hins vegar sögðu heimildarmenn í mörgum rannsóknarstofum í þremur ríkjum að aðeins nokkrar skoðanir á aðstöðu og tækjum hefðu átt sér stað.

Helst ætti að taka blöndu af jákvæðum og neikvæðum sýnum af handahófi frá hverri rannsóknarstofu reglulega til endurprófunar. Var það einhvern tíma gert? Já. Var það gert stöðugt? Nei, sagði vísindamaður hjá ICMR stofnun sem hefur ekki heimild til að tala við fjölmiðla.

Leitað var til reglubundinnar rannsóknarstofuvöktunar og gæðaeftirlitsgagna síðan í júlí 2020, ICMR og fjöldi QC rannsóknarstofnana þögðu.

MANNLEGA ÞÁTTUR: Próf geta farið úrskeiðis á ýmsum stigum - allt frá slæmri sýnatöku og geymslu til gallaðs útdráttar og mögnunar. Öll RT-PCR-sett innihalda innra eftirlit (IC) til að verjast atburðarás þegar ekkert RNA er dregið út/magnað upp, sem leiðir til rangrar neikvæðrar. IC getur verið utanaðkomandi eða innræn. Það er utanaðkomandi þegar gervi RNA sniðmát sameind er bætt við hvert sýni fyrir RNA útdrátt. Prófið er talið ógilt þegar tilbúið RNA greinist ekki eftir útdrátt og endurprófun er ávísað. Og innræn stjórn notar mannlegt „húshaldsgen“ sem er til staðar í sýninu; Ef það greinist ekki eftir RNA-útdráttarferlið ógildir prófið.

Mannsgenið tryggir einnig gæði sýnisins... En yfir 75% RT-PCR pökkum á indverskum markaði nota ódýrara utanaðkomandi innra eftirlit, sagði sameindalíffræðingur í Mumbai.

SOP ICMR í apríl 2020 um RT-PCR hélt því fram að hægt væri að hunsa utanaðkomandi eftirlit til útdráttar þar sem það mun ekki endurspegla gæði sýnisins sem safnað er. Það mælti með að aðskilið RNase P eða hvaða annað sem er til heimilishalds úr mönnum... ætti að keyra samsíða í sérstakri túpu... (til) að athuga bæði gæði sýnis sem safnað er og útdráttaraðferðina.

Í maí 2020 var stórútboðið sem ICMR/HLL flutti fyrir RT-PCR pökkum tilgreint svipaðar kröfur. Nokkrir framleiðendur héldu því fram að mismunandi fyrirtæki noti mismunandi innra eftirlit, þar með talið utanaðkomandi sem voru samþykkt af eftirlitsstofnunum eins og FDA og CEIVD, og ​​að óhagstætt val byggt á genum fyrir heimilishald myndi letja sanngjarna samkeppni. Að lokum var útboðið endurskoðað þannig að það innihélt bæði innræna og utanaðkomandi valkosti fyrir innra eftirlit.

Veiru STökkbreyting: RTR-PCR próf miðar á tiltekið svæði/svæði eins eða fleiri veirugena til að greina tilvist þess. Próf getur skilað fölskum neikvæðum niðurstöðum ef stökkbreyting á sér stað í hluta erfðamengisins sem metinn er. Próf sem nota mörg erfðafræðileg markmið, eins og þau sem eru notuð á Indlandi, eru ólíklegri til að blekkjast af stökkbreytingum.

Eftirlitsaðilar eins og FDA fylgjast reglulega með áhrifum stökkbreytinga á RT-PCR próf Þó sérfræðingar eins og Dr Rakesh Mishra, forstöðumaður Hyderabad Center for Cellular and Molecular Biology (CCMB), telji að ICMR ætti að hefja svipaða æfingu, gæti það ekki verið Auðvelt að fylgjast með rauntíma yfir 200 RT-PCR pökkum sem samþykktir eru á Indlandi gegn stökkbreytingum sem koma fram.

Fyrir það fyrsta hefur enginn framleiðandi (eða mun) birt opinberlega nákvæmar raðir sem prófanir hans miða við. Þegar þeir leggja fram til staðfestingar til ICMR, nefna þeir aðeins markgenin en ekki grunnröðina, sagði háttsettur rannsóknarmaður hjá heilbrigðisráðuneytinu.

Hingað til er þó grundvöllur fyrir því að vera nokkuð öruggur, jafnvel þótt engin rauntímaprófun á virkni sé fyrir hendi. Hingað til hafa Covid-19 afbrigði aðallega stökkbreytingar í S-geni (gaddaprótein). Meirihluti setta hér notar varðveitt (óbreytt) svæði skotmarka, sagði Dr Shanta Dutta, forstjóri National Institute of Cholera and Enteric Diseases (NICED), Kolkata.

Verðhrun

Á einu ári lækkaði verð RT-PCR settsins úr yfir 1.100 rúpum í undir 40 rúpum. Þar sem undanþága aðflutningsgjalds var afturkölluð í október 2020 fóru flest erlend vörumerki af indverskum markaði vegna 15% viðbótarkostnaðarbyrðinnar. Fjöldi indverskra vörumerkja hefur líka neitað að selja undir 100 rúpum. Margir hafa fundið hollur viðskiptavinur fyrirtækja sem hefur ekkert á móti því að borga smá aukalega til að tryggja gæði. Sumir bjóða jafnvel upp á mörg PCR-sett á mismunandi verðlagi.

Þó að enginn segi það á skrá, efast margir um gæði ódýrari samkeppninnar. Mótmælið er að sérhver prófunarbúnaður sem til er á markaðnum uppfyllir staðfestingarviðmið ICMR og að verðstríð kemur neytendum að lokum til góða.

Ekki eru þó allir sannfærðir. Samsvarandi lækkun á kostnaði við rannsóknarstofuprófið er úr 4.500 rúpum í 800 rúpíur. Þar að auki, veit einhver sem heimsækir rannsóknarstofuna sína á staðnum fyrir Covid próf hvaða sett er verið að nota? Hversu margar rannsóknarstofur munu eyða 100 Rs þegar þær komast upp með að nota Rs-40 sett? sagði einn af fyrstu indverskum framleiðendum Covid PCR setta.

TAKTU ÞÁTT NÚNA :The Express Explained Telegram Channel

The Ct gildi

RT-PCR próf magnar upp kjarnsýruna sem dregin er úr sýninu til að greina þá sem er sértæk fyrir Covid-19 vírusinn. Mögnunin gerist í lotum með þröskuld (Ct) gildi. Ljóst er að því hærra sem veiruviðvera/álag er, því lægra er Ct gildið eða fjöldi mögnunarlota sem þarf til að gera það greinanlegt.

ICMR stillti Ct gildið á 35 fyrir neikvæðar niðurstöður. Fyrir utan þetta eru öll snefilefni af vírus sem hugsanlega er til staðar talin hverfandi og sýnið er úrskurðað Covid neikvætt.

En ákveðin ríki eins og Maharashtra reyndu að teygja leyfismörk með því að stinga upp á Ct gildi upp á 24. Þar sem þetta myndi útiloka hugsanlega mikinn fjölda fólks með magn lægra en klínískt marktækt veiruálag, ítrekaði ICMR afstöðu sína um Ct gildi upp á 35 .

Hins vegar er lítill skýrleiki ef öll ríkin fylgja sama Ct viðmiðinu. Samkvæmt æðstu stjórnendum að minnsta kosti tveggja fjölríkja rannsóknarstofuneta hafa þeir fengið misvísandi og stundum ástæðulausar munnlegar leiðbeiningar um slíkar prófunarfæribreytur. Jafnvel sameindapróf er ekki ónæmt fyrir huglægri hlutdrægni.

Deildu Með Vinum Þínum: